(Flow cytometry, FCM) este un analizor de celule care măsoară intensitatea fluorescenței markerilor de celule colorate. Este o tehnologie de înaltă tehnologie dezvoltată pe baza analizei și sortării celulelor individuale. Poate măsura și clasifica rapid dimensiunea, structura internă, ADN-ul, ARN-ul, proteinele, antigenele și alte proprietăți fizice sau chimice ale celulelor și se poate baza pe colecția acestor clasificări.
Citometrul de flux constă în principal din următoarele cinci părți:
1 Camera de curgere și sistem fluidic
2 Sursă de lumină laser și sistem de modelare a fasciculului
3 Sistem optic
4 Electronică, stocare, afișare și sistem de analiză
5 Sistem de sortare a celulelor
Printre acestea, excitația laser în sursa de lumină laser și sistemul de formare a fasciculului este principala măsurătoare a semnalelor de fluorescență în citometria în flux. Intensitatea luminii de excitație și timpul de expunere sunt legate de intensitatea semnalului de fluorescență. Laserul este o sursă de lumină coerentă care poate oferi iluminare cu o singură lungime de undă, de mare intensitate și de înaltă stabilitate. Este sursa de lumină de excitație ideală pentru a îndeplini aceste cerințe.
Există două lentile cilindrice între sursa laser și camera de curgere. Aceste lentile focalizează un fascicul laser cu o secțiune transversală circulară emis de sursa laser într-un fascicul eliptic cu o secțiune transversală mai mică (22 μm × 66 μm). Energia laser din cadrul acestui fascicul eliptic este distribuită în conformitate cu o distribuție normală, asigurând o intensitate de iluminare consistentă pentru celulele care trec prin zona de detectare a laserului. Pe de altă parte, sistemul optic constă din mai multe seturi de lentile, găuri și filtre, care pot fi împărțite aproximativ în două grupuri: în amonte și în aval de camera de curgere.
Sistemul optic din fața camerei de curgere constă dintr-o lentilă și un orificiu. Funcția principală a lentilei și a orificiului (de obicei, două lentile și un orificiu) este de a focaliza fasciculul laser cu o secțiune transversală circulară emisă de sursa laser într-un fascicul eliptic cu o secțiune transversală mai mică. Acest lucru distribuie energia laserului conform unei distribuții normale, asigurând o intensitate constantă de iluminare pentru celule în zona de detectare a laserului și minimizând interferența de la lumina parazită.
Există trei tipuri principale de filtre:
1: Filtru de trecere lungă (LPF) - permite trecerea numai luminii cu lungimi de undă mai mari decât o anumită valoare.
2: Filtru de trecere scurtă (SPF) - permite trecerea numai luminii cu lungimi de undă sub o anumită valoare.
3: Filtru trece-bandă (BPF) - permite trecerea luminii dintr-un anumit interval de lungimi de undă.
Diferite combinații de filtre pot direcționa semnale de fluorescență la diferite lungimi de undă către tuburi fotomultiplicatoare individuale (PMT). De exemplu, filtrele pentru detectarea fluorescenței verzi (FITC) în fața PMT sunt LPF550 și BPF525. Filtrele folosite pentru a detecta fluorescența portocalie-roșu (PE) în fața PMT sunt LPF600 și BPF575. Filtrele pentru detectarea fluorescenței roșii (CY5) în fața PMT sunt LPF650 și BPF675.
Citometria în flux este utilizată în principal pentru sortarea celulelor. Odată cu progresul tehnologiei informatice, dezvoltarea imunologiei și invenția tehnologiei anticorpilor monoclonali, aplicațiile sale în biologie, medicină, farmacie și alte domenii devin din ce în ce mai răspândite. Aceste aplicații includ analiza dinamicii celulare, apoptoza celulară, tiparea celulelor, diagnosticarea tumorii, analiza eficacității medicamentelor etc.
Ora postării: 21-sept-2023
