(Citometrie de flux, FCM) este un analizor de celule care măsoară intensitatea fluorescenței markerilor de celule colorate. Este o tehnologie de înaltă tehnologie dezvoltată pe baza analizei și sortării celulelor unice. Poate măsura și clasifica rapid dimensiunea, structura internă, ADN -ul, ARN -ul, proteinele, antigenele și alte proprietăți fizice sau chimice ale celulelor și se poate baza pe colectarea acestor clasificări.
Citometrul de flux constă în principal din următoarele cinci părți:
1 Sistem de cameră de flux și fluidice
2 Sistem de modelare a luminii cu laser și modelare a fasciculului
3 Sistem optic
4 Sistem de electronice, stocare, afișare și analiză
5 Sistem de sortare a celulelor
Printre ele, excitația cu laser în sursa de lumină laser și sistemul de formare a fasciculului este principala măsurare a semnalelor de fluorescență în citometrie de flux. Intensitatea luminii de excitație și timpul de expunere sunt legate de intensitatea semnalului de fluorescență. Laserul este o sursă de lumină coerentă care poate oferi o singură lungime de undă, intensitate ridicată și iluminare de înaltă stabilitate. Este sursa ideală de lumină de excitație pentru a îndeplini aceste cerințe.
Există două lentile cilindrice între sursa laser și camera de curgere. Aceste lentile focalizează un fascicul laser cu o secțiune transversală circulară emisă de la sursa laser într-un fascicul eliptic cu o secțiune transversală mai mică (22 μm × 66 μm). Energia laser în cadrul acestui fascicul eliptic este distribuită în funcție de o distribuție normală, asigurând o intensitate de iluminare constantă pentru celulele care trec prin zona de detectare a laserului. Pe de altă parte, sistemul optic este format din mai multe seturi de lentile, găuri și filtre, care pot fi împărțite aproximativ în două grupuri: în amonte și în aval de camera de curgere.
Sistemul optic din fața camerei de curgere este format dintr -o lentilă și o gaură. Funcția principală a lentilei și a găurilor de pin (de obicei două lentile și o gaură) este de a focaliza fasciculul laser cu o secțiune transversală circulară emisă de sursa laser într-un fascicul eliptic cu o secțiune transversală mai mică. Aceasta distribuie energia laser în funcție de o distribuție normală, asigurând o intensitate de iluminare constantă pentru celulele din zona de detectare a laserului și minimizarea interferențelor din lumina rătăcită.
Există trei tipuri principale de filtre:
1: Filtru de trecere lungă (LPF) - permite doar lumina cu lungimi de undă mai mari decât o valoare specifică.
2: Filtru de trecere scurtă (SPF) - Permite doar lumina cu lungimi de undă sub o valoare specifică.
3: Filtru de bandă (BPF) - Permite să treacă doar lumina într -un interval specific de lungime de undă.
Diferite combinații de filtre pot direcționa semnale de fluorescență la diferite lungimi de undă către tuburi fotomultiplicatoare individuale (PMT). De exemplu, filtrele pentru detectarea fluorescenței verzi (FITC) în fața PMT sunt LPF550 și BPF525. Filtrele utilizate pentru detectarea fluorescenței roșii portocalii (PE) în fața PMT sunt LPF600 și BPF575. Filtrele pentru detectarea fluorescenței roșii (CY5) în fața PMT sunt LPF650 și BPF675.
Citometria de flux este utilizată în principal pentru sortarea celulelor. Odată cu avansarea tehnologiei computerizate, dezvoltarea imunologiei și invenția tehnologiei anticorpului monoclonal, aplicațiile sale în biologie, medicină, farmacie și alte domenii devin din ce în ce mai răspândite. Aceste aplicații includ analiza dinamicii celulare, apoptoza celulară, tastarea celulelor, diagnosticul tumorii, analiza eficacității medicamentului etc.
Timpul post: 21-2023 septembrie
