(Citometria în flux, FCM) este un analizor celular care măsoară intensitatea fluorescenței markerilor celulari colorați. Este o tehnologie de înaltă tehnologie dezvoltată pe baza analizei și sortării celulelor individuale. Poate măsura și clasifica rapid dimensiunea, structura internă, ADN-ul, ARN-ul, proteinele, antigenele și alte proprietăți fizice sau chimice ale celulelor și se poate baza pe colectarea acestor clasificări.
Citometrul de flux este alcătuit în principal din următoarele cinci părți:
1 Cameră de curgere și sistem fluidic
2 Sursă de lumină laser și sistem de modelare a fasciculului
3 Sistem optic
4 Sistem electronic, de stocare, de afișare și de analiză
Sistem de sortare a 5 celulelor
Printre acestea, excitația cu laser în sursa de lumină laser și sistemul de formare a fasciculului este principala măsurătoare a semnalelor de fluorescență în citometria în flux. Intensitatea luminii de excitație și timpul de expunere sunt legate de intensitatea semnalului de fluorescență. Laserul este o sursă de lumină coerentă care poate oferi iluminare cu o singură lungime de undă, intensitate ridicată și stabilitate ridicată. Este sursa de lumină de excitație ideală pentru a îndeplini aceste cerințe.
Există două lentile cilindrice între sursa laser și camera de curgere. Aceste lentile focalizează un fascicul laser cu o secțiune transversală circulară emis de sursa laser într-un fascicul eliptic cu o secțiune transversală mai mică (22 μm × 66 μm). Energia laser din cadrul acestui fascicul eliptic este distribuită conform unei distribuții normale, asigurând o intensitate constantă a iluminării pentru celulele care trec prin zona de detecție a laserului. Pe de altă parte, sistemul optic este format din mai multe seturi de lentile, orificii de fixare și filtre, care pot fi împărțite aproximativ în două grupuri: în amonte și în aval de camera de curgere.
Sistemul optic din fața camerei de flux este alcătuit dintr-o lentilă și un orificiu de ac. Funcția principală a lentilei și a orificiului de ac (de obicei două lentile și un orificiu de ac) este de a focaliza fasciculul laser cu o secțiune transversală circulară emis de sursa laser într-un fascicul eliptic cu o secțiune transversală mai mică. Aceasta distribuie energia laser conform unei distribuții normale, asigurând o intensitate constantă a iluminării pentru celulele din zona de detecție a laserului și minimizând interferențele cauzate de lumina parazită.
Există trei tipuri principale de filtre:
1: Filtru de trecere lungă (LPF) - permite trecerea doar a luminii cu lungimi de undă mai mari decât o anumită valoare.
2: Filtru trecere scurtă (SPF) - permite trecerea doar a luminii cu lungimi de undă sub o anumită valoare.
3: Filtru trece-bandă (BPF) - permite trecerea luminii doar într-un anumit interval de lungimi de undă.
Diferite combinații de filtre pot direcționa semnale de fluorescență la diferite lungimi de undă către tuburi fotomultiplicatoare (PMT) individuale. De exemplu, filtrele pentru detectarea fluorescenței verzi (FITC) în fața PMT sunt LPF550 și BPF525. Filtrele utilizate pentru detectarea fluorescenței portocalii-roșii (PE) în fața PMT sunt LPF600 și BPF575. Filtrele pentru detectarea fluorescenței roșii (CY5) în fața PMT sunt LPF650 și BPF675.
Citometria în flux este utilizată în principal pentru sortarea celulelor. Odată cu avansarea tehnologiei informatice, dezvoltarea imunologiei și inventarea tehnologiei anticorpilor monoclonali, aplicațiile sale în biologie, medicină, farmacie și alte domenii devin din ce în ce mai răspândite. Aceste aplicații includ analiza dinamicii celulare, apoptoza celulară, tipizarea celulară, diagnosticarea tumorilor, analiza eficacității medicamentelor etc.
Data publicării: 21 septembrie 2023
